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ELISA实验常见问题2022已更新

发布时间:2022-12-27浏览:109次

ELISA实验原理简单,步骤少,流程短,试剂盒操作相对简便,实验小白也能轻松上手。然而,实验上手虽快,想要得到可靠的实验结果,却并不那么容易。为了更好地助力科研实验,恒远生物在这里将大家关心的ELISA试剂盒实验的常见问题整理如下:

一、关于试剂盒:


1.你们的ELISA试剂盒能检测什么物种?

目前我们的试剂盒检测的种属主要为人、小鼠、大鼠、猴、兔、猪、鸡、植物等,种属齐全。如果试剂盒的命名带有特定指向(如人),代表专门针对此物种;没有指明物种,则代表该试剂盒在目前公司产品涉及的种属(例如人、小鼠、大鼠、猴、兔等)内通用;其他特殊种属的检测适用性,请联系技术支持确认。


2.96TELISA试剂盒能检测多少样本?是否需要做复孔?

为了保证实验结果的准确性,我们建议标准品和样品都做复孔,但并不强行要求ELISA实验一定要做复孔/3复孔,客户可根据自己的需求设定复孔实验,具体实验情况可咨询恒远生物技术指导。


3.需检测的样品较多,能否减少标曲的孔数?

为保证结果的准确度,不建议减少标曲的孔数,请确保能够检测至少6个不同的标准品浓度(含空白孔)。


4.ELISA试剂盒要使用多次,但样本较多,是否可以只做一次标曲?

虽然ELISA实验的操作步骤相同,但每次实验的各种影响因素都会有所变化。所以,每次实验时,都必须重新绘制标准曲线,以得到更准确可靠的检测结果。如果需要做多次实验,溶解后的最高浓度标准品可以分装保存于-20℃条件下,避免反复冻融,半个月内使用有效。


二、关于样本


1.血清血浆样本应该选用哪种真空采血管收集?

血清:不含抗凝剂的采血管/含促凝剂采血管(通常为红色、黄色、橘色管盖的采血管)

血浆:含抗凝剂的采血管(通常为绿色、紫色管盖的采血管)


样品收集后,若在1周内进行检测,可保存于2-8℃条件下;若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃条件下(1个月内检测)或-80℃条件下(3个月内检测),避免反复冻融。检测前,应缓慢融化冷冻过的样本,并离心除去冻融过程中产生的沉淀物。


2. 采集时,如何尽可能避免溶血现象?

溶血可由多种理化因素和毒素引起。在体外,机械性强力振荡、低温冷冻等诱因均可引起溶血。为避免溶血对检测结果产生影响,应注意:


(1)静脉采血时,回抽压力不宜过大;


(2)一次性采血量不宜过少;


(3)采集的全血不宜激烈振荡;


(4)离心转速不宜过大;


(5)收集的全血需尽快处理成血清/血浆,全血不能冻融;


(6)若需要麻醉采血,需使用没有溶血作用的麻醉剂。


3.组织/细胞样本收集中提到的“反复冻融",过程应该如何操作?

(1)组织样本:组织研磨后,将其-80℃放置1h/液氮放置0.5h,再置于30℃水浴锅中轻微振荡,使其迅速融化,反复操作1-2次即可;

(2)细胞样本:按上述操作步骤,反复冻融2-3次。若为膜蛋白,可以适当做超声处理,但需要控制好超声的温度、频率;


4.怎样判断我的样本是否需要稀释或做其他处理?

试剂盒的检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围,建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度,并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果是常规样本类型,可以咨询ELISA技术支持,以获取样本的推荐稀释倍数,并安排预实验检测;如果样品中待测物的浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩;如果样本中的分析物浓度远低于试剂盒的检测限,建议选择灵敏度更高的试剂盒来检测。


更多实验问题可咨询我司业务员,为您提供专业的技术指导。


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