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ELISA实验标本该如何处理?

发布时间:2022-11-08浏览:213次

ELISA试剂盒标本处理复杂多样,一不小心没处理好可能会导致实验的数据偏差。那到底怎么处理才算是比较合理的呢?恒远生物为您总结一份ELISA实验标本处理攻略,请收好啦!


一、血清的采集、处理和保存

1.真空采血针采集2ml 新鲜血液,加入无菌试管中。

2.采血后室温静置1小时。

3.将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。

4.取上清。分装冻存备用,2-8℃下,可放置保存24-48小时;-20℃下,可放置保存1个月;-70℃下,可放置保存6个月。

5.根据您的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染,因为菌体中可能含有含有内源性过氧化物酶,也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜时检测。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。


二、血浆的采集、处理和保存

1.真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中。

2.按1:9加入抗凝剂(EDTA、草酸钠、肝素),30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集)。

3.将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心5 min,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。

4.取上清。分装冻存备用,2-8℃下,可放置保存24-48小时;-20℃下,可放置保存1个月;-70℃下,可放置保存6个月。

5.根据您的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求,建议使用 EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。注意事项:制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA, 抗凝的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性。


三、尿液的采集、处理和保存

1.采集尿液样本500ul加入无菌试管中。

2.将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10 min,将离心好的样本留上清,弃下面沉淀。 

3.取上清。分装冻存备用,2-8℃下,可放置保存24-48小时;-20℃下,可放置保存 1 个月;-70℃下,可放置保存6个月。

4.根据您的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。


四、细胞上清液的采集、处理和保存

1.采集细胞培养上清液500ul,加入无菌试管中。

2.将采集血液用离心机 4℃,2500rpm 离心 10 min,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。 

3、取上清。分装冻存备用,2-8℃下,可放置保存24-48小时;-20℃下,可放置保存1个月;-70℃下,可放置保存6个月。

4.根据您的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。


五、各类组织匀浆的采集、处理和保存

1.采集组织,在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,剔除附属的结缔组 织,称取组织块。

2.用移液管量取0.1M PBS或者用0.86%冷生理盐水,匀浆介质或生理盐水的体积总量应 该是组织块重量的9倍,用眼科小剪尽快剪碎组织块(天然时操作要在冰水浴中进行,将盛有组织的小烧杯放入冰水中)。

3.匀浆的方式有多种: 

a) 手工匀浆:将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,使组织匀浆化。 

b) 机器匀浆:用组织捣碎机 10000~15000r/min 上下研磨制成10%组织匀浆,也可用 内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10秒/次,间隙30秒,连续3~5 次,在冰水中进行),皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。

4.将制备好的10%匀浆用离心机4℃,3000rpm离心15min,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。

5.取上清。分装冻存备用,2-8℃下,可放置保存24-48小时;-20℃下,可放置保存1个月;-70℃下,可放置保存6个月。

6.根据您的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。 


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